Higienos instituto Sveikatos informacijos centras išleido periodinį sveikatos statistikos leidinį „Lietuvos gyventojų sveikata ir sveikatos priežiūros įstaigų veikla 2019 m. (išankstiniai duomenys)”. Jame pateikiami pagrindiniai išankstiniai praėjusių metų Lietuvos gyventojų sveikatos ir svesiatos priežiūros įstaigų veiklos rodikliai.

Antivirusinis resveratrolio poveikis

2020-05-22

Šiuo metu visame pasaulyje – naujojo koronaviruso protrūkis. Šis koronavirusas formaliai vadinamas sunkiu ūminiu respiracinio sindromo koronavirusu 2 (SŪRS-CoV-2), o jo sukeliama liga – koronaviruso liga 2019 (COVID-19) [1]. Šis virusas pirmą kartą nustatytas 2019 m. gruodį Kinijoje, Hubėjaus provincijoje. COVID-19 būdingas karščiavimas, nuovargis, sausas kosulys, dusulys, taip pat slogos simptomai [2].

 

Koronavirusai yra virusų grupė, galinti sukelti ligas tiek gyvūnams, tiek žmonėms. Kai kurie jų sukelia peršalimo ligą [3, 4]. Tačiau jau anksčiau buvo aprašyti du šios grupės virusai, sukėlę sunkesnių koronavirusų ligų protrūkius – SŪRS (angl. SARS) 2002–2003 metais ir Artimųjų Rytų respiracinio sindromo (ARRS, angl. MERS) 2012 metais [3, 4].

Šiuo metu mokslininkai dar tik tiria naująjį SŪRS-CoV-2, ieško galimų prevencijos ir gydymo būdų. Remiantis naujojo koronaviruso sukeliamos infekcijos diagnostikos ir gydymo rekomendacijomis, specifinio antivirusinio gydymo šiuo metu nėra [2]. Taip pat nėra jokių pagrįstų įrodymų apie kitų medikamentų efektyvumą (pvz., antivirusinių vaistų, gliukokortikoidų) [2]. Pacientams rekomenduojamas tik simptominis gydymas. Tačiau įvertinus, kad SŪRS-CoV-2 yra tos pačios grupės virusas kaip ir ARRS bei SŪRS koronavirusai, galima analizuoti šių virusų sukeltų infekcijų eksperimentinius gydymo būdus. Vieno tyrimo metu buvo siekta nustatyti, ar natūralus stilbeno darinys resveratrolis (trans-3, 5, 4′-trihidroksistilbenas) slopina ARRS-CoV infekciją [5].

 

Resveratrolis

Resveratrolis – tai natūrali medžiaga, randama daugiau nei 70-yje augalų, pasižyminti imuninę sistemą reguliuojančiu ir uždegimą slopinančiu poveikiu [6–10]. Be to, šis medikamentas veikia kaip antioksidantas – šalina laisvuosius radikalus [11, 12]. Tyrimai rodo, kad resveratrolis veikia daugelį signalinių kelių skirtinguose audiniuose (STAT3, mTOR, hedgehog) [13–15]. Viename eksperimentiniame tyrime su laboratoriniais gyvūnais buvo tirtas resveratrolio mechanizmas, kaip jis stimuliuoja imuninę sistemą [6]. Šis tyrimas atskleidė, kad resveratrolis reguliuoja branduolio faktoriaus κB (NFκB), IκB kinazės, Jun N-terminalinės kinazės (JNK), ir c-Jun ekspresiją blužnies limfocituose.

2017 m. publikuoti tyrimo, kuriame buvo vertintas resveratrolio poveikis sveikų asmenų imuninei sistemai, rezultatai [16]. Tiriamiesiems buvo skiriama 1000 mg resveratrolio per parą 28 dienas. Šis medikamentas buvo saugus ir gerai toleruojamas. Jo vartojimas buvo susijęs su reikšmingu cirkuliuojančių T limfocitų ir reguliacinių T limfocitų kiekio padidėjimu ir šiek tiek mažesniu, bet taip pat reikšmingu uždegiminių citokinų TNF-alfa ir monocitus pritraukiančio baltymo 1 (MCP-1) kiekio sumažėjimu kraujo plazmoje [16]. Pateikiama duomenų, kad resveratrolis pasižymi antivirusiniu poveikiu sergant Epšteino-Baro viruso (EBV) [17, 18], enteroviruso 71 (EV71) [19], herpes simplex viruso (HSV) [20], gripo viruso [21], respiracinio sincitinio viruso (RSV) [22, 23] ir rinoviruso [24] sukeltomis infekcijomis. Klinikinėje praktikoje resveratrolis dažniausiai skiriamas esant ląstelinio imuniteto pažeidimui ir/ arba dažnai kartojantis Herpes šeimos virusų sukeltoms infekcijoms.

 

Resveratrolio poveikis ARRS-CoV

Norint ištirti resveratrolio poveikį ARRS-CoV, šiuo koronavirusu užkrėstos Vero E6 ląstelės buvo veikiamos skirtingos koncentracijos resveratroliu [5]. Po 48 valandų ląstelių morfologija buvo atvaizduota mikroskopu, ląstelių proliferacija nustatyta atliekant MTT tyrimą, ląstelių gyvybingumas – neutralaus raudonojo dažiklio susigėrimo į ląsteles (NRU) tyrimą, o citotoksiškumo lygiai – laktato dehidrogenazės (LDH) tyrimą. Rezultatai parodė, kad 250 ir 125 μM koncentracijos resveratrolis palengvina ARRS-CoV infekuotų Vero E6 ląstelių vienasluoksnį sunaikinimą (1 pav.). MTT tyrimų (1a pav.) ir NRU tyrimų (1b pav.) rezultatai parodė, kad 250–125 μM koncentracijos resveratrolis gali sumažinti ARRS-CoV infekcijos sukeltą ląstelių žūtį [5]. Be to, atlikus LDH tyrimą, resveratroliu paveiktoms grupėms buvo nustatytas mažesnis citotoksiškumas po ARRS-CoV infekcijos (1c pav.), o citotoksiškumo profiliai gerai koreliavo su ląstelių proliferacijos ir ląstelių gyvybingumo tyrimais. Atlikus LDH tyrimą tik resveratroliu paveiktoms ląstelėms paaiškėjo, kad resveratrolis sukėlė Vero E6 ląstelėms nedidelį citotoksiškumą (1d pav.). Net ir esant didžiausiai 250 μM koncentracijai, citotoksiškumas buvo ne didesnis kaip 25 proc. Resveratrolis (250 μM) padėjo ARRS-CoV infekuotų ląstelių citotoksiškumą sumažinti iki maždaug 25 proc. (1c pav.). Taigi, resveratrolis sumažino ARRS-CoV infekcijos sukeltą ląstelių žūtį [5].

Norint nustatyti, ar resveratrolis tiesiogiai slopina ARRS-CoV infekciją, buvo vertintas resveratrolio poveikis ARRS-CoV veikimui RNR lygiu. Paveikus resveratroliu 24 ir 48 valandą nuo infekcijos pradžios buvo surinkti ląstelių mėginiai [5]. Kad būtų galima palyginti santykinius ARRS-CoV RNR lygius, visai ekstrahuotai RNR buvo atlikta kiekybinė realaus laiko PGR. 24 valandas nuo infekcijos pradžios ARRS-CoV RNR lygiai 250, 200, 150, 62,5 ir 31,25 μM koncentracijos resveratroliu paveiktose ląstelėse buvo žymiai mažesni nei ARRS-CoV infekuotose ląstelėse (2a pav.). Tačiau mažos koncentracijos resveratrolio, įskaitant 62,5 ir 31,25 μM kiekius, slopinamasis poveikis 48 valandas po infekcijos sumažėjo. Šie duomenys rodo, kad resveratrolis slopino ARRS-CoV RNR replikaciją, nors tam, kad būtų galima išlaikyti antivirusinį poveikį, reikia labai koncentruoto resveratrolio [5]. Vėliau atlikus plokštelių mažinimo tyrimą nustatytas infekcinis ARRS-CoV titras po resveratrolio poveikio. 2b pav. pateikti duomenys rodo, kad, paveikus 250, 200 ir 150 μM koncentracijos resveratroliu, 48 valandas nuo infekcijos pradžios ARRS titrai labai sumažėjo. Šis rezultatas atitinka rezultatus, gautus atliekant kiekybinį realaus laiko PGR 48 valandas nuo infekcijos pradžios. Apibendrinant galima teigti, kad šie duomenys rodo, jog dėl ląstelių veikimo resveratroliu ARRS-CoV RNR lygis ir infekciniai titrai sumažėjo, tai greičiausiai lėmė pastebėtą ląstelių žūties sumažėjimą [5].

Norėdami nustatyti, ar resveratrolis trukdo patekti ARRS-CoV infekcijai, juo buvo paveiktos ląstelės kartu su ARRS-CoV po 3 valandų arba tik prasidėjus infekcijai (3a ir 3b pav.). Buvo išmatuota ląstelių proliferacija (3c ir 3d pav.) ir nustatyti viruso titrai supernatantuose (3e pav.) [5]. Rezultatai parodė, kad, net ir prasidėjus ARRS-CoV infekcijai resveratrolis vis tiek sumažino viruso titrą. Tokie pat pastebėjimai buvo gauti išmatavus ląstelių proliferaciją ir virusų titrus. Tai rodo, kad resveratrolis slopina prasidėjusią ARRS-CoV infekciją [5].

Praėjus 24 valandoms po infekcijos buvo nudažytas ARRS-CoV nukleokapsidės (N) baltymas po paveikimo resveratroliu ir konfokaliniu mikroskopu vizualizuotas N baltymų pasiskirstymas [5]. 250 μM resveratrolio pašalino N baltymo fluorescencinį signalą, palyginti su kontrolinėmis grupėmis, o 150 μM resveratrolio koncentracija parodė ribotą N baltymo signalo sumažėjimą. Norint išsiaiškinti, ar N baltymo signalo stiprumas buvo susijęs su resveratrolio koncentracija, buvo dažytas tarpląstelinis N baltymas ląstelėse, išaugintose įvairiose lėkštelėse su šulinėliais. Rezultatai parodė, kad resveratrolis stipriai slopino ARRS nukleokapsidės baltymų transliaciją priklausomai nuo dozės, ypač esant 250–125 μM koncentracijai [5].

Taip pat buvo tirta, ar resveratrolis gali sumažinti ARRS-CoV sukeltą apoptozę. Rezultatai parodė, kad prasidėjus ARRS-CoV infekcijai suskaldytos kaspazės 3 baltymų raiška reikšmingai padidėjo, ir tai patvirtina, kad ARRS-CoV gali sukelti ląstelių apoptozę [5]

Pastebėta, kad 62,5 μM ir mažesnės koncentracijos resveratrolis slopina ARRS-CoV per 24 valandų laikotarpį, bet per 48 valandas po infekcijos šis poveikis išnyksta [5]. Slopinamasis poveikis po 48 valandų po infekcijos gali išnykti dėl resveratrolio suskaidymo terpėje po tokio ilgo inkubavimo laikotarpio. Kadangi didelės resveratrolio dozės vis dar pasižymi tam tikru citotoksiškumu (1e pav.), gydant ARRS infekuotus pacientus labiau pageidautinos mažesnės dozės. Norint ištirti galimybę naudoti resveratrolį mažesnėmis dozėmis, iš eilės (kas 24 valandas) ARRS-CoV infekuotos ląstelės buvo veiktos mažesnėmis resveratrolio koncentracijomis, ir įvertinta ląstelių proliferacija, ląstelių gyvybingumas ir citotoksiškumas (4 pav.) [5]. Taigi, iš eilės skiriamas resveratrolis mažesnėmis dozėmis gali slopinti ARRS-CoV.

 

Apibendrinimas

Šiuo metu pasaulyje sparčiai plinta koronaviruso šeimos virusas SŪRS-CoV-2, kuris sukelia COVID-19. Šis virusas priklauso tai pačiai virusų grupei kaip ir SŪRS bei ARRS. Nors nė vienai infekcijai nėra patvirtinto specifinio antivirusinio gydymo, tačiau anksčiau atlikti tyrimai rodo, kad kai kurie medikamentai gali būti efektyvūs. Vienas tokių eksperimentinių tyrimų analizavo resveratrolio poveikį ARRS koronavirusui. Resveratrolis yra natūrali medžiaga, randama augaluose. Jo imunomoduliacinis, uždegimą slopinantis, antivirusinis poveikis įrodytas jau anksčiau. Šis tyrimas parodė, kad resveratrolis reikšmingai slopino ARRS infekciją ir pailgino ląstelių išgyvenamumą po virusinės infekcijos. Be to, buvo nustatyta, kad po gydymo resveratroliu sumažėjo nukleokapsidės (N) baltymo, būtino ARRS-CoV replikacijai, raiška. Resveratrolis sumažino ARRS-CoV sukeltą apoptozę in vitro. Taigi šis vaistas galimai yra efektyvus ARRS sukeltos infekcijos profilaktikai ir gydymui. Resveratrolio efektyvumą galima svarstyti ir COVID-19 gydymui, tačiau tam reikia atlikti eksperimentinius ir klinikinius tyrimus.

Plačiau skaitykite žurnale „Farmacija ir laikas“ 2020 m. Nr. 3–4.

 

© 2006 Visos teisės saugomos.